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實(shí)驗(yàn)步驟

每50～100mg 組織加入0.2體積 TRIzol

1.加鋼珠1顆,設(shè)置研磨儀參數(shù)：12單位振頻,1min,每種樣品基本充分勻漿

2. 將上述勻漿液每0.2體積 TRIzol 試劑用量的勻漿液中加入0.04體積氯仿，蓋緊管蓋，手動(dòng)劇烈震搖15 秒鐘，然后室溫靜置2～3 分鐘。

3. 4℃ 10,000g 離心10 分鐘。

4. 小心吸取上層水相（無色）加入到新試管中，同時(shí)計(jì)算所吸取的水相體積。不必過多吸取，防止吸入DNA和蛋白雜質(zhì)（中間層，白色）。

5. 加入所吸取水相等體積預(yù)冷的異丙醇，蓋緊管蓋，輕輕搖勻。

6. 室溫靜置10 分鐘，待RNA 充分沉淀（為減少RNA 降解，此步驟可省略）。

7. 4℃ 10,000g 離心10 分鐘。

8. 將上清棄除（注意別丟棄沉淀），每管加入0.2體積75%乙醇潤(rùn)洗，蓋緊管蓋，輕輕晃動(dòng)試管，以去除殘留的異丙醇和鹽份。4℃ 7,500g 離心5 分鐘。

9. 將上清棄除（注意別丟棄沉淀），打開管蓋，將RNA 沉淀干燥（室溫?fù)]發(fā)或真空干燥）。注意RNA 沉淀不可完全干燥，否則難以溶解。

10. 將RNA 沉淀溶解于適量的無RNase 水中。如果RNA 沉淀溶解不完全，將使OD260/OD280≤1.6。此RNA 溶液可用于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)，或者-70℃保存。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果